Citometrie de flux în imunofenotiparea tumorilor hematologice

Imunofenotiparea prin citometrie în flux și-a luat locul în setul de instrumente de diagnostic în ultimul deceniu.

Pe măsură ce echipamentele s-au îmbunătățit și gama de anticorpi și fluorocromi s-a extins, imunofenotiparea celulelor a devenit mai precisă, făcând identificarea populațiilor anormale de celule mai precisă. Criteriile de diagnostic pentru entitățile din cadrul bolilor hematologice au fost, de asemenea, rafinate în ultimii zece ani. Clasificarea Organizației Mondiale a Sănătății (OMS) pentru tumorile sistemului hematopoietic și limfatic utilizează o abordare multiparametrică în diagnostic pe baza analizei caracteristicilor morfologice, fenotipice și genotipice ale fiecărei entități a bolii. Totuși, nu este suficient de rentabil pentru a efectua un set de teste pe fiecare eșantion.

Dar apoi caz în care este necesar să se solicite citometrie în flux? În 2006, experți internaționali interesați s-au adunat la Spitalul Bethesda din Statele Unite pentru a formula recomandări bazate pe consens pentru studii citometrice de flux. Spre deosebire de conferințele de consens anterioare, în care reactivii necesari pentru a investiga entități specifice bolii au fost revizuite, grupul Bethesda a abordat problema citometriei în flux pe baza unei abordări clinice utilizând o abordare mai practică. S-a convenit ca. imunofenotiparea citometrică în flux este necesară în următoarele situații clinice: citopenii (în special bicitopenie și pancitopenie), număr crescut de leucocite (inclusiv limfocitoză, monocitoză și eozinofilie); prezența celulelor atipice sau a exploziilor în sângele periferic, măduva osoasă sau fluide corporale; plasmocitoză sau gammopatie monoclonală; și organomegalie și produse tisulare anormale.

În situațiile clinice enumerate, imunofenotiparea prin citometrie în flux poate servi ca metodă de screening sensibilă pentru detectarea tumorilor maligne hematologice și poate ajuta, de asemenea, la excluderea bolii. Grupul Bethesda a fost de acord să citometrie în flux nu este indicat în mod normal în următoarele situații: proliferarea celulelor neutrofile mature, hipergammaglobulinemia policlonală, policitemia, trombocitoza și bazofilia. În plus, experții au convenit că citometria în flux este un instrument util pentru determinarea stadiului tumorilor limfatice de sânge și diagnosticate anterior, monitorizarea răspunsului terapeutic (inclusiv detectarea bolii reziduale minime [MRD]), recidiva sau progresia diagnosticului de tumori maligne hematologice intercurente, cum ar fi ca sindrom mielodisplazic (SMD) legat de terapie.

Rezumatul analizează utilizarea fenotipării citometriei în flux în diagnosticul tumorilor maligne hematologice dintr-o practică de zi cu zi, inclusiv modul în care informațiile obținute pot fi utilizate pentru a selecta metode de diagnostic suplimentare.

Fenotipare citometrică de flux în diagnosticul și urmărirea tumorilor hematologice

În investigarea tumorilor maligne hematopoietice trebuie să urmăm pașii de mai jos: 1) identificarea celulelor din diferite linii celulare și determinarea dacă acestea sunt celule mature sau imature (de exemplu, detectarea celulelor limfoide B mature și a mieloblastelor); 2) identificarea celulelor anormale pe baza expresiei antigenului semnificativ anormale; 3) documentarea detaliată a fenotipului populațiilor anormale de celule (adică, înregistrarea prezenței sau nu a antigenilor) și documentarea dacă intensitatea colorării cu anticorpi marcați cu fluorocrom a scăzut sau a crescut; 4) evaluarea dacă informațiile disponibile sunt diagnostice pentru o anumită entitate a bolii și, dacă nu, compilarea unei liste de entități posibile, completată de metode de testare sugerate care pot avea valoare diagnostic (de exemplu, imunohistochimie, testare citogenetică convențională, hibridizare fluorescentă in situ [ FISH] și teste de diagnostic molecular); și 5) furnizarea de informații cu privire la imunofenotipul care poate avea o valoare prognostică suplimentară, inclusiv identificarea potențialelor ținte pentru terapiile potențiale vizate.

Neoplazii limfoide mature

Acest grup include leucemia cronică, tumorile limfoide și limfoamele non-Hodgkin. Identificarea acestui grup de boală se bazează nu numai pe un imunofenotip similar cu celulele limfoide mature normale (adică, imunoglobuline de suprafață pe celulele B mature), ci și pe lipsa caracteristicilor antigenice caracteristice imaturității (de exemplu, expresia TdT, CD34, colorare slabă intensitate pentru CD45).

În neoplaziile limfoide cu celule B mature, citometria în flux poate fi utilizată pentru a identifica expresia țintelor vizate de o terapie potențială direcționată către anticorpi, precum și pentru a furniza unele informații prognostice suplimentare, cum ar fi exprimarea CD38 și ZAP-70 în leucemie limfocitară cronică/cazuri de limfom limfocitar mic (CLL/SLL). Citometria de flux ca metodă de detectare a bolii reziduale minime în urmărirea terapiei.

Neoplazii limfoide cu celule T și NK mature

Imunofenotiparea citometrică în flux poate ajuta la diagnosticul și clasificarea tumorilor limfoide mature cu celule T și NK. Cu toate acestea, este adesea mai dificilă identificarea celulelor T și NK cu fenotipuri anormale decât cele ale celulelor B anormal de mature. Prin urmare, studiile citometrice în flux sunt de obicei doar o parte a investigației tumorilor celulelor T și NK. În urma diagnosticării tumorilor cu celule T și NK, studiile citometrice în flux pot ajuta la identificarea potențialelor ținte pentru terapiile vizate.

Anomalii ale celulelor plasmatice

Tulburările plasmatice sunt adesea diagnosticate pe baza nivelurilor crescute de ser sau urină gamma globulină; cele două grupuri ale acestora sunt proliferarea reactivă policlonală și gammopatiile monoclonale. Acestea din urmă pot fi subdivizate în continuare. Diagnosticul anomaliilor celulelor plasmatice se bazează pe următoarele condiții: detectarea proliferării celulelor plasmatice (mai mult de 10% din celulele măduvei osoase); detectarea fenotipului anormal și/sau a clonalității; și o clasificare suplimentară pe baza caracteristicilor morfologice, de laborator, radiologice și alte caracteristici clinice. Fenotiparea citometrică în flux este un instrument util pentru identificarea celulelor plasmatice anormale și pentru a face distincția între neoplasmele celulare limfoide și plasmatice. În plus, citometria în flux poate furniza informații prognostice suplimentare.

Citometria de flux poate juca, de asemenea, un rol în diagnosticul de neoplazii de explozie, maturarea neoplasmelor mieloide și monocitice, neoplasmele mastocitice și hemoglobinuria paroxistică, precum și în detectarea bolii reziduale minime.

(Sursa: Craig FE, Foon KA. Imunofenotipare citometrică de flux pentru neoplasme hematologice. Sânge. 2008; 111: 3941−3967.)