INVESTIGAȚIA GENELOR PREDICĂTOARE ÎN POPULAȚIA PACIENTULUI PENTRU Pacienții cu ULCEROZA COLITISĂ A MORBUSULUI UNGAR

DISSERTARE DE DOCTORAT ACESTE INVESTIGAȚII ALE PREDICȚIEI GENELOR ÎN UNGERULUI MORBUS CROHNOS ȘI ULCEROZA COLITISĂ ÎN POPULAȚIA PACIENTULUI Lili Magyari Universitatea din Pécs, Facultatea de Medicină 2007, Facultatea de Medicină, Departamentul de Genetică Medicală și Dezvoltare Pediatrică

universitar

CUPRINS 1. Introducere 1.1. Caracteristicile bolilor inflamatorii intestinale 1.1.1. Boala Crohn 1.1.2. Colita ulcerativă 1.1.3. Compararea celor două boli 2. Obiectivele testului 2.1. Căutarea variantelor genetice 2.1.1. CARD15 gena R702W, G908R, 1007finsC 2.1.2. SLC22A4 gena C1672T, SLC22A5 gena G-207C 2.1.3. Gena CTLA4 A + 49G 2.1.4. Gena IL23R rs10889677 C/A, rs2201841 T/C, rs1884444 G/T 3. Pacienți și metode 3.1. Populația de pacienți studiată 3.2. Caracterizarea fenotipului 3.3. Analiza genotipului 3.3.1. CARD15 gena R702W, G908R, 1007finsC 3.3.2. SLC22A4 gena C1672T, SLC22A5 gena G-207C 3.3.3. Gena CTLA4 A + 49G 3.3.4. Gena IL23R rs10889677 C/A, rs2201841 T/C, rs1884444 G/T 3.4. Analiza statistică 4. Rezultate 4.1. CARD15 gena R702W, G908R, 1007finsC 4.2. SLC22A4 gene C1672T, SLC22A5 gene G-207C 4.3.CTLA4 gene A + 49G 4.4.IL23R gene rs10889677 C/A, rs2201841 T/C, rs1884444 G/T 5. Discutarea rezultatelor și concluziile 6. Rezumatul rezultatelor 7. Rezumatul disertație 8. Lucrări corelate 9. Rezumate citate 10. Referințe 11. Mulțumiri 2

LISTA ABREVIERILOR IBD: boală inflamatorie intestinală Denumirea CD: boala Crohn UC: colită ulcerativă SNP: polimorfism nucleotidic unic PCR: reacție în lanț polimerazică: polimorfism de lungime a fragmentului de restricție CARD15: proteină care conține domeniu de recrutare caspază 15 SLC22A4: Familia purtătorului de solut 22, membru 4 SLC22A5: Familia purtătorului de solut 22, membrul 5 CTLA4: Antigenul limfocitului T citotoxic 4 gena IL23R: Receptorul interleukinei 23 UTR: Regiunea netradusă EDTA: Acid etilendiaminetetraacetic

Figura 1: Tipuri de colită ulcerativă. (www.crohn-colitis.hu) 1.1.3. Comparația celor două boli Există o diferență semnificativă în ce parte a tractului gastrointestinal (Figura 2) 10. Colita ulcerativă afectează doar colonul, în timp ce boala Crohn poate afecta intestinul subțire și colonul, adesea tractul gastrointestinal superior poate fi adesea afectat ca esofag, stomac (Fig. 2) 10,27,44. Colita ulcerativă apare doar în colon, deci dacă îndepărtarea colonului devine necesară, apare o vindecare permanentă 10. În schimb, boala Crohn poate afecta întregul sistem digestiv de la gură la rect, astfel încât îndepărtarea secțiunii inflamate nu aduce vindecare, boala oriunde poate reveni 10,27,44. Figura 2: Secțiuni intestinale provocate de inflamație de cele două boli. (www.aloeride.eu/ibd.html) O altă diferență importantă se bazează pe afectarea peretelui intestinal (Figurile 3 și 4) 10. În colita ulcerativă, fenomenele inflamatorii sunt limitate la mucoasa și submucoasa intestinală, în timp ce în boala Crohn, perete toate straturile afectate de la mucoasă la seroasă (Figurile 3 și 4) 10,27,43,44. 6

În timp ce colita ulcerativă produce inflamație asociată, secțiunile intestinale segmentare, inflamate și intacte ale bolii Crohn alternează 10. Figura 3: Secțiunile intestinale ale bolii Crohn sănătoase (1) și Crohn (2) și respectiv colite ulcerative (3), respectiv. imagine histologică. Rândul de jos arată imaginile endoscopice. (www.crohn-colitis.hu) Figura 4: Straturi ale peretelui intestinal. (www.crohn-colitis.hu) În cazul bolii Crohn, inflamația se răspândește în straturi mai adânci, atât de mult încât ajungând la suprafața exterioară a intestinului se poate lipi de tractul intestinal mic sau gros adiacent, de organele abdominale (vezica urinară), uter, vagin). zbor anormal între organe, așa-numitul se formează o fistulă internă 10. Conținutul intestinal care conține bacterii poate trece prin fistulă în organele sterile sau poate intra în cavitatea abdominală liberă și poate provoca alte boli (de exemplu, abcesul). de asemenea, o fistulă externă care se formează pe suprafața pielii din jurul rectului 10. În colita ulcerativă, aceste complicații nu apar 10. Când intestinul este inflamat, bolnav, peretele intestinal este incapabil să funcționeze corect, să absoarbă substanțele nutritive 10. Acesta este unul dintre motivele pentru care pacienții inflamatori intestinali sunt adesea subnutriți, 7

anorexică 10. Simptomul tipic al bolii Crohn este scăderea în greutate 27,44. Dacă boala afectează intestinul subțire, se poate produce malabsorbție, simptome de malnutriție se pot dezvolta 10.44. În schimb, colita ulcerativă, deoarece colonul nu este afectat nici de pierderea în greutate, nici de malabsorbție este tipică 10. 8

Citokina IL-23 și receptorul său au fost în centrul interesului. IL-23 joacă un rol important în procesele inflamatorii congenitale și mediate de celulele T în intestin 15,20,25,41. Duerr și colab. IL23R a fost identificat ca o genă IBD prin examinarea a 12 SNP în regiunea genei, dintre care unele predispun la IBD (rs10889677, rs2201841, rs1004819, rs11209032, rs1495965), alții protejează împotriva acesteia (rs11209026, rs10489629, rs10489629, rs10489629, rs )), în timp ce unii au fost indiferenți (rs7530511, rs1884444) 12. Am evidențiat 3 diferențe, una în rs10889677 C/A și rs2201841 T/C în regiunea 3 UTR a genei, care predispun la boală, iar cealaltă în rs1884444 G/T care nu este asociat cu IBD la populațiile evreiești și neevreiești pe care le-au studiat 13. 11

4. REZULTATE 4.1. CARD15 gene R702W, G908R, 1007finsC Am examinat 100 de pacienți adulți cu boala Crohn (47 bărbați, 53 femele, vârsta medie: 37,3 ani) și 94 de martori clinic sănătoși (47 bărbați, 47 femei, vârsta medie: 45,6 ani) 3. Gena CARD15 pentru Frecvența alelei mutante 1007finsC a fost semnificativ crescută în comparație cu populația adultă de pacienți Crohn cu martori adulți, ceea ce este de asemenea evident la nivelul heterozigoților și homozigotilor, cu 17% din populația adultă de pacienți Crohn purtând ambele sau o alelă mutantă comparativ cu martorii 4,3% (Tabelul 1) 3. Examinând mutațiile R702W și G908R ale genei CARD15 la populația adultă Crohn, nu am găsit nicio diferență în comparație cu martorii adulți, fie la nivelul homozigotilor, fie la frecvența alelelor (Tabelul 1) 3. Tabelul 1: Distribuția frecvenței de alele a variantelor genei CARD15 la pacienții adulți Crohn și martorii adulți 3. Genotipul CARD15 genotip R702W G908R 1007finsC CC CT TT Pacienți adulți cu boala Crohn n = 100 87 (87,0%) 12 (12,0%) 1 (1,0%) Co control n = 94 87 (92,6%) 5 (5,3%) 2 (2,1%) Frecvența alelei T 7,00% 4,79% GG GC CC 94 (94,0%) 6 (6,0%) - 93 (98,9%) 1 (1,16%) - Frecvența alelei C 3,00% 0,53% 83 (83,0%) 90 (95,7%) insc 15 (15,0%) 4 (4,3%) insc insc 2 (2,0%) - Frecvența alelei Cins 9,50% * 2,13% * P